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PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

猴頭菌（猴頭蘑、刺猬菌）CLDN5 (Claudin 5) ELISA Kit拉丁屬名: Hericium  erinaceus

黑曲霉GRIN2B (Glutamate Receptor, Ionotropic, N-Methyl-D-Aspartate 2B) ELISA Kit用途: 除臭

節(jié)桿菌屬GRIN1 (Glutamate Receptor, Ionotropic, N-Methyl-D-Aspartate 1) ELISA Kit拉丁屬名: Arthrobacter     pascens

蘇云金芽孢桿菌GRIN2A (Glutamate Receptor, Ionotropic, N-Methyl-D-Aspartate 2A) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus thuringiensis

枯草芽孢桿菌FXN (Frataxin) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus subtilis

球孢白僵菌LOX-1 (Lectin Like Oxidized Low Density Lipoprotein Receptor 1) ELISA Kit用途: 生物防治

馬鏈球菌馬亞種ACTN4 (Actinin Alpha 4) ELISA Kit拉丁屬名: egui subsp.equi

柱狀田頭菇（茶樹菇、楊樹菇）sAC (Soluble Adenylate Cyclase) ELISA Kit用途: 用于科研教學。

GeobactersFMC (Soluble Fibrin Monomer Complex) ELISA Kit拉丁屬名: Geobacter  sp.

蘇云金芽孢桿菌PECAM1/CD31 (Platelet/Endothelial Cell Adhesion Molecule 1) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

枯草芽孢桿菌COL18α1 (Collagen Type XVIII Alpha 1) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus  subtilis

大腸埃希菌ApoB48 (Apolipoprotein B48) ELISA Kit拉丁屬名: coli

*百脈根根瘤菌sTNF-1 (Soluble Tumor Necrosis Factor 1) ELISA Kit用途: 與百脈根共生固氮

鴨肝炎病毒MITF (Microphthalmia Associated Transcription Factor) ELISA Kit拉丁屬名: Duck hepatitis virus

枯草芽孢桿菌BMP-5 (Bone Morphogenetic Protein 5) ELISA Kit 拉丁屬名: Bacillus subtilis
幼蟲芽胞桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒 ECE1(Endothelin Converting Enzyme 1)  內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶1抗原丁烯基苯酞N-BUTYLIDENEPHTHALIDE中藥標準品  分 子 式: C12H12O2 分 子 量: 188.22

ECE2(Endothelin Converting Enzyme 2)  內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶2抗原班氏試劑(Benedict's Reagent)標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

ECP(eosinophil cationic protein)mouse rat  嗜酸性粒細胞陽離子蛋白抗原秋水仙堿溶液(Colchicine,10mg/ml)標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

ED-1 (Ectodermal Dysplasia 1)  外胚層抗原核酸沉淀溶液(TCA法)標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

rhEGF(rh-Epidermal growth factor)  重組人表皮生長因子黑蔓定堿3-Pyridinecarboxylicacid,(3R,5S,*S,6S,9S,9aS,10R)-5,6-bis(benzoyloxy)octahydro-9-hydroxy-2,2,*,9-tetramethyl-2H-3,9a-methano-1-benzoxepin-10-ylester化學標準品 分 子 式: C35H37NO8 分 子 量:

EGF(Epidermal growth factor)rat  重組表皮生長因子抗原(大鼠)水楊酸甲酯Methyl  Salicylate中藥標準品  分 子 式: C8H8O3 分 子 量: 152.14732

EGFL7(EGF-like domain containing protein 7)  類表皮生長因子域7抗原Earle's平衡鹽溶液(10×EBSS,含鈣鎂糖)標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量: