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PCR反應鑒定——PCR反應條件:

客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析，提供實驗報告給您。

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領域常規參照基因，較佳地管家基因，優選地為RPPH1的擴增區域，其中所述質粒載體為本領域常規質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。

其中所述待測目的基因為本領域常規待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

以下列是公司正在熱銷的產品：

多主葡萄殼菌TAT (Thrombin/Antithrombin Complex) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

枯草芽孢桿菌TSP1 (Thrombin Sensitive Protein 1) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus  subtilis

瓜亡革菌TR (Thrombin Receptor) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

平菇PT (Prothrombin) ELISA Kit用途: 食用、藥用

木糖葡糖酸醋桿菌F1+2 (Prothrombin Fragment 1+2) ELISA Kit拉丁屬名: Gluconacetobacter xylinus

釀酒酵母KERA (Keratocan) ELISA Kit拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

美澳型核果褐腐病菌VCL (Vinculin) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

鼠傷寒沙門氏菌DEFα5 (Defensin Alpha 5, Paneth Cell Specific) ELISA Kit拉丁屬名: typhimurium

殼菌FSA (Fetal Sulfoslycoprotein Antigen) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

熱帶假絲酵母EED (Embryonic Ectoderm Development) ELISA Kit 拉丁屬名: Candida  tropicalis

枇杷假尾孢褐斑病CTAGE (Cutaneous T-Cell Lymphocyte Associated Antigen) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

香菇DPT (Dermatopontin) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

毛簇木霉SRF/IF (Skin Reactive Factor/Inflammatory Factor) ELISA Kit拉丁屬名: Trichoderma velutinum

解淀粉芽孢桿菌植物亞種CLA/CTAGE (Cutaneous Lymphocyte Associated Antigen) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus  amyloliquefaciens subsp. plantarum

禽腺病毒SYK (Spleen Tyrosine Kinase) ELISA Kit拉丁屬名: Avian       adenovirus
桿狀巴爾通體探針法熒光定量PCR試劑盒規格GAPDH  3-磷酸甘油醛脫氫酶(人)抗原蔗糖咪唑溶液(2.25mol/L,pH7.0)標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

CXCR3/CD183 peptide  細胞表面趨化因子受體3抗原絡緦trans-Cinnamyl β-D-glucopyranoside中藥標準品  分 子 式: C15H20O6 分 子 量: 296.3157

GATA-3(GATA binding factor 3)  GATA結合蛋白3抗原粘毛黃芩素III4H-1-Benzopyran-4-one,2-(3,6-dihydroxy-2-methoxyphenyl)-5,7-dihydroxy-8-methoxy-對照藥材 分 子 式: C17H14O8 分 子 量: 346.28826

GATA-4(GATA binding factor 4)  GATA結合蛋白4抗原Western封閉液(奶粉)標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

Gax(growth arrest-specific homeobox)  生長終止特異性同源盒基因抗原麥角甾-5,24(28)-二烯-3,7,16-三醇Ergosta-5,24(28)-diene-3,7,16-triol,(3b,7a,16b)- (9CI)對照藥材 分 子 式: C28H46O3 分 子 量:

GDF8/MSTN(growth differntiation factor 8)  生長分化因子8抗原腦苷脂BCerebroside B對照藥材 分 子 式:  分 子 量:

GDNF (Glial cell line-derived neurotrphic factor)  膠質細胞源性神經營養因子抗原銀杏雙黃酮GINKGETIN中藥標準品  分 子 式: C32H22O10 分 子 量: 566.51108