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PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應鑒定——PCR反應條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領域常規參照基因，較佳地管家基因，優選地為RPPH1的擴增區域，其中所述質粒載體為本領域常規質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。

其中所述待測目的基因為本領域常規待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析，提供實驗報告給您。
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多主葡萄殼菌HSP-40 (Heat Shock Protein 40) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

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孟氏假單胞菌HSP-70 (Heat Shock Protein 70) ELISA Kit拉丁屬名: Pseudomonas  mandelii

青霉HSP-90 (Heat Shock Protein 90) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

劉志恒氏菌HSP gp96 (Heat Shock Protein glycoprotein 96) ELISA Kit拉丁屬名: Zhihengliuella sp.

嗜熱鏈球菌HSF2 (Heat Shock Transcription Factor 2) ELISA Kit 拉丁屬名: Streptococcus  thermophilus

地衣芽孢桿菌HSF1 (Heat Shock Transcription Factor 1) ELISA Kit 拉丁屬名: Bacillus  licheniformis

淤泥金黃桿菌PSG1/SP1 (Pregnancy Specific Beta-1-Glycoprotein 1) ELISA Kit拉丁屬名: Chryseobacterium  caeni

葡萄座腔菌屬LZM (Lysozyme) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

綠色木霉TERF2 (Telomeric Repeat Binding Factor 2) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

無色殼囊孢TFF1 (Trefoil Factor 1) ELISA Kit 用途: 代謝產物

貝倫格葡萄座腔菌梨生?；?/span>TFF2 (Trefoil Factor 2) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

枯草芽孢桿菌WARS (Tryptophanyl tRNA Synthetase) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

類干酪乳桿菌PEDF (Pigment Epithelium Derived Factor ) ELISA Kit 拉丁屬名: Lactobacillus  paracasei

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GRP78(glucose regulated protein 78)  葡萄糖調節蛋白78抗原（熱休克蛋白70蛋白5）四甲基脲1,1,3,3-TETRAMETHYLUREA化學標準品 分 子 式: C5H12N2O 分 子 量: 116.16

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phospho-GSK-3 Beta(pSer9)  磷酸化葡萄糖合成激酶-3β抗原五味子醇甲schizandrin中藥標準品  分 子 式: C24H32O7 分 子 量: 432.51

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GSR/GRase(glutathione reductase)  谷胱甘肽還原酶抗原15-脫氧尤可甾醇15-Deoxoeucosterol對照藥材 分 子 式: C29H46O4 分 子 量:

A/H1N1-M2 Human(Avian influenza Matrix Protein-2 Human)  A型人病毒H1N1-M2蛋白多肽甲基 二乙酰氧基-6-姜二醇(3R,5S)-1-(3,4-dimethoxyphenyl)decane-3,5-diyl diacetate化學標準品 分 子 式: C22H34O6 分 子 量: 394.50176