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PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應鑒定——PCR反應條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因為本領域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

黑木耳Monkey EPO (Erythropoietin) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

黑曲霉Monkey SELL (L-Selectin) ELISA Kit 拉丁屬名: Aspergillus  niger

地下節(jié)桿菌Monkey SAP (Serum Amyloid P Component) ELISA Kit拉丁屬名: Arthrobacter subterraneus

解淀粉芽孢桿菌Monkey SDF2L1 (Stromal Cell Derived Factor 2 Like Protein 1) ELISA Kit 拉丁屬名: Bacillus amyloliquefaciens

枯草芽孢桿菌Monkey C4BP (C4 Binding Protein) ELISA Kit 拉丁屬名: Bacillus subtilis

Monkey CASP10 (Caspase 10) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus aryabhattai Shivaji et al

小鏈霉菌Monkey STAT3 (Signal Transducer and Activator of Transcription 3) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

繩生毛殼Monkey HBμ (Hemoglobin, Mu) ELISA Kit拉丁屬名: Chaetomium funicola

釀酒酵母Monkey CNTNAP1 (Contactin Associated Protein 1) ELISA Kit 拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

黑木耳(186)Monkey Ntn1 (Netrin 1) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

巨大芽孢桿菌Monkey HGF (Hepatocyte Growth Factor) ELISA Kit 拉丁屬名: Bacillus megaterium de Bary

CandidaMonkey GCP-2 (Granulocyte Chemotactic Protein 2) ELISA Kit拉丁屬名: Candida boidinii

變平滑假絲酵母Monkey PC/CPG (Choline Phosphoglyceride) ELISA Kit拉丁屬名: Candida metapsilosis

柴油食烷菌Monkey MYO (Myosin) ELISA Kit拉丁屬名: Alcanivorax dieselolei

Enterobacter cowanii Inoue et al. Monkey G6PD (Glucose 6 Phosphate Dehydrogenase) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用
病毒G型探針法熒光定量PCR試劑盒說明書DUSP26/MKP8  雙特異性蛋白磷酸酶26抗體（絲裂原活化蛋白激酶磷酸酶8）蕨甙 D(S)-6-(2-(beta-D-Glucopyranosyl)oxy)-2,3-dihydro-3-hydroxy-2,2,5,7-tetramethyl-1H-inden-1-one對照藥材 分 子 式: C21H30O8 分 子 量: 410.4581

phospho-FER/TYK3(Tyr402)  磷酸化酪氨酸蛋白激酶3抗體6,7-二羥基-4-(三氟甲基)香豆素6,7-Dihydroxy-4-trifluoromethylcoumarin化學標準品 分 子 式: C10H5O4F3 分 子 量: 246.1395

GAK protein  細胞周期蛋白G相關激酶抗體大黃酚Chrysophanic acid中藥標準品  分 子 式: C15H10O4 分 子 量: 254.24

phospho-LATS1+LATS2 (Thr1079 +Thr1041)  磷酸化抑制基因LATS1/LATS2抗體8-羥基松脂醇(+) 8-hydroxypinoresinol化學標準品 分 子 式: C20H22O7 分 子 量: 374.38448

MOBKL2B  Mob1同源蛋白MOBKL2B抗體pH計電極保護液標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

MOBKL2C  Mob1同源蛋白MOBKL2C抗體茅蒼術醇Spiro[4.5]dec-6-ene-2-methanol,a,a,6,10-tetramethyl-, (2R,5S,10S)-中藥標準品  分 子 式: C15H26O 分 子 量: 222.36634

N acetylglucosamine kinase  N-乙酰氨基葡萄糖激酶抗體Tris-甘氨酸電泳粉劑(1×)標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量: