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PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

仁果殼小圓孢菌ANXA5 (Annexin A5) ELISA Kit用途: 植物病原物，為該病防治提供依據(jù)

嗜熱脂肪地芽孢桿菌ALDOC (Aldolase C, Fructose Bisphosphate) ELISA Kit拉丁屬名: Geobacillus  stearothermophilus

耐寒短桿菌TP/TXA2R (Thromboxane Receptor) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

黑曲霉SHBG (Sex Hormone Binding Globulin) ELISA Kit拉丁屬名: Aspergillus niger

西宮皮生球菌C4BP (C4 Binding Protein) ELISA Kit 拉丁屬名: Dermacoccus nishinomiyaensis

阿魏側(cè)耳M-AChR M3 (Muscarinic Acetylcholine Receptor M3) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

枯草芽孢桿菌PRELP (Proline Arginine Rich End Leucine Rich Repeat Protein) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus subtilis

蘇云金芽孢桿菌AGA (Anti-Glycolipid Antibody) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

佛雷德里克斯堡假單胞菌ODC (Ornithine Decarboxylase) ELISA Kit 拉丁屬名: Pseudomonas  frederiksbergensis

極單胞菌屬PC/CPG (Choline Phosphoglyceride) ELISA Kit拉丁屬名: Polaromonas  vacuolata

灰略紅鏈霉菌RND1 (Rho Family GTPase 1) ELISA Kit拉丁屬名: Streptomyces griseorubens

大腸埃希氏菌IGF1R (Insulin Like Growth Factor 1 Receptor) ELISA Kit拉丁屬名: Escherichia  coli

草菇TFR/CD71 (Transferrin Receptor) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

禿裸鏈霉菌EFNA4 (Ephrin A4) ELISA Kit 用途: 產(chǎn)生代謝產(chǎn)物具有抑菌活性

ActinokineosporaTFF2 (Trefoil Factor 2) ELISA Kit 拉丁屬名: Actinokineospora sp.
海魚分枝桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格PSMD6/P44S10  蛋白酶調(diào)解因子6抗體柯托苷(2,6-Dihydroxy-4-methoxyphenyl)phenylmethanone對照藥材 分 子 式: C14H12O4 分 子 量: 244.24268

OCEL1  緊密連接蛋白/小分子膠原蛋白OCEL1抗體黑介子苷b-D-Glucopyranose, 1-thio-,1-[N-(sulfooxy)-3-butenimidate], potassium salt (1:1)中藥標準品  分 子 式: C10H16NO9S2-.K+ 分 子 量: 397.46364

ODF3B  外致密纖維蛋白3B抗體乙酸鹽緩沖液(0.05mol/L,pH5.0)標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

PGBD1/Cerebral protein 4  腦蛋白4抗體野甘草屬醇1-Naphthalenemethanol,8-(benzoyloxy)- decahydro-5-[(3E)-5-hydroxy-3-methyl-3- pentenyl]-1,4a-dimethyl-6-methylene-,(1R,- 4aR,5S,8R,8aR)- 對照藥材 分 子 式:  分 子 量:

PGBD3  PGBD3蛋白抗體靈芝萜酮二醇Lanosta-7,9(11)-dien-3-one,24,25-dihydroxy-, (24S)-化學(xué)標準品 分 子 式: C30H48O3 分 子 量: 456.70032

PGGT1β  香葉烯基轉(zhuǎn)移酶1β抗體漢黃芩素Wogonin中藥標準品  分 子 式: C16H12O5 分 子 量: 284.26348

MYCBP2  MYC結(jié)合蛋白2抗體楊梅素3,5,7-Trihydroxy-2-(3,4,5-trihydroxyphenyl)-4H-chromen-4-one中藥標準品  分 子 式: C15H10O8 分 子 量: 318.2351