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傳代方法：

產(chǎn)品僅用于科研收到細(xì)胞后，取出培養(yǎng)瓶在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況。

（一）如果細(xì)胞未長滿，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液，僅留下10ml培養(yǎng)液在瓶內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)。。

（二）如果細(xì)胞已長滿，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：

1. 棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣，鎂離子）洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，倒轉(zhuǎn)放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱，然后又將培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)大約30秒后，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓分散，輕敲幾下培養(yǎng)培養(yǎng)瓶，細(xì)胞隨即脫落下來。

3. 加入6-8ml完全培養(yǎng)基，吸出，分到新的培養(yǎng)瓶中。一傳二。

注意：傳代后一半用我們的培養(yǎng)基，一半用你們的，以免細(xì)胞不適應(yīng)而造成生長不好。

細(xì)胞名稱 Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人細(xì)胞；Li-7-Cas9-756

形態(tài)特性: 上皮樣

生長特性: 貼壁生長

特征特性: 該細(xì)胞是采用慢病毒感染的方式使Li-7細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)Cas9-Flag-Neo，經(jīng)400ug/mlG418篩選得到的單，經(jīng)WesternBlotting驗(yàn)證該可以表達(dá)Cas9蛋白，可直接用Crispr技術(shù)編輯基因組DNA。

培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)10%FBS；400ug/mlG418

傳代方法: 1:2傳代；2~3天換液1次。

傳代情況:

凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS

注意事項(xiàng)：

1.接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。

2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。

3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。

4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。

5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。

6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。

7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）產(chǎn)品僅用于科研觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
特別聲明：本產(chǎn)品及我公司所售其他產(chǎn)品均為科研類試劑產(chǎn)品，嚴(yán)禁用于藥物、醫(yī)療及其他非科研用途。

SAA3(HumanserumamyloidA3)ELISAKit人血清淀粉樣蛋白A3  規(guī)格：20mg  

Gbp4(Humanguanylatenucleotidebindingprotein4)ELISAKit人鳥苷酸結(jié)合蛋白4  規(guī)格：10mg  

cytb561(Humanlipocalin2)ELISAKit人細(xì)胞色素b561  規(guī)格：20mg  

LCN2(Humanlipocalin2)ELISAKit人脂質(zhì)運(yùn)載蛋白2  規(guī)格：20mg  

aFABP(Humanadipocytefattyacid-bindingprotein)ELISAKit人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白  規(guī)格：20mg  

GPC-3(HumanGlypican-3)ELISAKit人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3  規(guī)格：20mg  

GLUT3(HumanGlucosetransporter3)ELISAKit人葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3  規(guī)格：20mg  

RBP(HumanRetinolbindingprotein)ELISAKit人視黃醇結(jié)合蛋白  規(guī)格：20mg  

8-OHdG(Humanhydroxylysine)ELISAKit人8羥基脫氧鳥苷  規(guī)格：50mg  

Hyl(Humanhydroxylysine)ELISAKit人羥賴氨酸  規(guī)格：20mg  

GAP(HumanGTPaseactivatingprotein)ELISAKit人GTP酶活化蛋白  規(guī)格：30mg  

Apo-H(HumanApolipoproteinH)ELISAKit人載脂蛋白H  規(guī)格：20mg  

GPI(Humanglycophosphatidylinositol)ELISAKit人糖磷脂酰肌醇  規(guī)格：20mg  

PWM(Humanpoke*mitogen)ELISAKit人美洲商陸素  規(guī)格：10mg  

LPS(HumanLipopolysaccharides)ELISAKit人脂多糖/內(nèi)毒素  規(guī)格：20mg  
Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人細(xì)胞；Li-7-Cas9-756供應(yīng)商4補(bǔ)充中3848784-87-2英文名：Lup-20(29)-en-28-oic acid, 3-[ D-glucopyranosyl(1→4)[ L-rhamnopyranosyl) (1→2)-L-arabinopyranosyl]oxy], (3,4)-)  

CAS登錄號(hào)：848784-87-2

分子式：C47H76O16

分子量：896

分子結(jié)構(gòu)：

外觀：白色晶體

規(guī)格：5 mg/支

純度：HPLC≥98%

用途：用于含量測定/鑒定/藥理實(shí)驗(yàn)等。

提取來源：毛莨科植物白頭翁Pulsatilla chinensis (Bunge) Regel.

溶解性：可溶于、、乙醇等溶劑，不溶于。

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貯存條件： 4℃冷藏、密封、避光

有效期： 2年