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細(xì)胞名稱 犬腎細(xì)胞；MDCK-C09

形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣

生長(zhǎng)特性: 懸浮生長(zhǎng)

特征特性: 該細(xì)胞屬專利保藏，其特征特性尚未公開(kāi)。

培養(yǎng)條件: MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle＇sBalancedSalts)10%FBS

傳代方法: 1:3傳代，3-4天傳1次

傳代情況: C5

凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS

特別聲明：本產(chǎn)品及我公司所售其他產(chǎn)品均為科研類試劑產(chǎn)品，嚴(yán)禁用于藥物、醫(yī)療及其他非科研用途。

傳代方法：

產(chǎn)品僅用于科研收到細(xì)胞后，取出培養(yǎng)瓶在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況。

（一）如果細(xì)胞未長(zhǎng)滿，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液，僅留下10ml培養(yǎng)液在瓶?jī)?nèi)繼續(xù)培養(yǎng)。。

（二）如果細(xì)胞已長(zhǎng)滿，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：

1. 棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣，鎂離子）洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，倒轉(zhuǎn)放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱，然后又將培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)大約30秒后，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓分散，輕敲幾下培養(yǎng)培養(yǎng)瓶，細(xì)胞隨即脫落下來(lái)。

3. 加入6-8ml完全培養(yǎng)基，吸出，分到新的培養(yǎng)瓶中。一傳二。

注意：傳代后一半用我們的培養(yǎng)基，一半用你們的，以免細(xì)胞不適應(yīng)而造成生長(zhǎng)不好。

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）產(chǎn)品僅用于科研觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
注意事項(xiàng)：

1.接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。

2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過(guò)的）。

3.嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。

4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無(wú)菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。

5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。

6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。

7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

宇佐美曲霉變種3α,30-Diacetyloxy-12α-hydroxy-23-oxoeupha-7,24-dien-21,16β-olid-28-oic acid 28-O-β-D-glucopyranosyl ester分子式：C40H56O15

布氏乳桿菌Methyl lucidenate L分子式：C28H40O7

乳桿菌屬Hancolupenone分子式：C30H48O

鏈球菌屬Niga-ichigoside F1分子式：C36H58O11

格氏乳球菌Methyl lucidenate N分子式：C28H42O6

乳酸乳球菌乳脂亞種Methyl ganoderenate D分子式：C31H42O7

季也蒙假絲酵母2α,3α,24-Trihydroxyursa -12,20(30)-dien-28-oic acid分子式：C30H46O5

異常漢遜酵母異常變種Lucidenic acid D分子式：C29H38O8

異常威克漢姆酵母Methyl lucidenate D分子式：C30H40O8

死亡谷芽孢桿菌Cucurbitacin IIa分子式：C32H50O8

梭狀芽孢桿菌Tirucallol分子式：C30H50O

解淀粉芽孢桿菌植物亞種Euphol分子式：C30H50O

酒香酵母屬Kihadanin B分子式：C26H30O9

假絲酵母屬Alisol B 23-acetate分子式：C32H50O5

鮭色鎖擲孢酵母16,23-Oxidoalisol B分子式：C30H46O4

檸檬酸桿菌屬Rubuminatus B分子式：C29H44O5

靈芝Saikosaponin b2分子式：C42H68O13

糙皮側(cè)耳Saikosaponin b3分子式：C43H72O14

膠韌革菌(榆耳，榆蘑)Saikosaponin b1分子式：C42H68O13

阿氏絲孢酵母6″-O-Acetylsaikosaponin b3分子式：C45H74O15
犬腎細(xì)胞；MDCK-C09規(guī)格凝乳酶 Rennet 規(guī)格：35mg/支

生長(zhǎng)抑素 Somatostatin 規(guī)格：256μg/支

單磷酸阿糖腺苷 Vidarabine monophosphate 規(guī)格：50mg

環(huán)磷腺苷 Adenosine cyclophosphate 規(guī)格：50mg

胸腺嘧啶 Thymine 規(guī)格：100mg

還原型谷胱甘肽 Glutathione 規(guī)格：200mg

琥珀酰明膠 Succinylated gelatin 規(guī)格：700mg

去羥肌苷 Didanosine 規(guī)格：100mg

N-（2）-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺 N- (2) -L- alanyl glutamine -L- 規(guī)格：50mg

甘精 Insulin glargine 規(guī)格：15mg/支

舍雷肽酶 Serrapeptase 規(guī)格：25mg

鹽酸半胱氨酸 Cysteine hydrochloride 規(guī)格：100mg