ELISA試劑盒的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過(guò)反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。在測(cè)定時(shí)，受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開(kāi)。

      此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。 ELISA試劑盒可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體。然而，故加強(qiáng)各個(gè)環(huán)節(jié)的質(zhì)量保證才能充分發(fā)揮其方法學(xué)的優(yōu)點(diǎn)。

操作注意事項(xiàng)：

（1）試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄。

（2）實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存。

（3）不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。

（4）使用一次性的吸頭以免交叉污染。

（5）用干凈的塑料容器配置洗滌液。用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

（6）洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。

（7）底物A應(yīng)揮發(fā)避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋。底物B對(duì)光敏感避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。

（8）加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。

（9）ELISA試劑盒按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。此外，（10）在加樣過(guò)程中，應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡，以免影響反應(yīng)結(jié)果。若不慎產(chǎn)生氣泡，應(yīng)輕輕晃動(dòng)酶標(biāo)板以去除。（11）讀取結(jié)果時(shí)，應(yīng)使用專(zhuān)業(yè)的酶標(biāo)儀，確保波長(zhǎng)準(zhǔn)確，避免人為誤差。讀取時(shí)間也需嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)執(zhí)行，過(guò)早或過(guò)晚都可能影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。（12）每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)設(shè)立陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照，以監(jiān)控實(shí)驗(yàn)過(guò)程的有效性，確保實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性。（13）對(duì)于異常結(jié)果，應(yīng)進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，避免單一實(shí)驗(yàn)的偶然性導(dǎo)致的誤判。（14）實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，所有使用過(guò)的器材和試劑應(yīng)按照生物安全規(guī)定妥善處理，防止環(huán)境污染和交叉感染。遵循以上操作注意事項(xiàng)，不僅能確保ELISA試劑盒的準(zhǔn)確性和靈敏度，還能有效延長(zhǎng)其使用壽命，為科研和臨床診斷提供堅(jiān)實(shí)的技術(shù)支持。