在細(xì)胞培養(yǎng)的微觀世界中，懸浮細(xì)胞成簇現(xiàn)象宛如一場(chǎng)精妙的生命交響曲。這些原本應(yīng)該獨(dú)立懸浮的細(xì)胞，在特定培養(yǎng)條件下會(huì)自發(fā)聚集，形成大小不一的細(xì)胞團(tuán)塊，猶如夜空中璀璨的星團(tuán)般引人注目。這種現(xiàn)象在生物制藥領(lǐng)域尤為常見(jiàn)，特別是在CHO細(xì)胞、HEK293細(xì)胞等常用工程細(xì)胞系的大規(guī)模培養(yǎng)過(guò)程中。

     從細(xì)胞生物學(xué)角度來(lái)看，這種成簇行為是細(xì)胞間相互作用的多維度體現(xiàn)。以下是懸浮細(xì)胞成簇或者成團(tuán)的原因及解決方法

可能原因： 1、培養(yǎng)液中含鈣、鎂離子 ； 2、支原體污染； 3、蛋白酶過(guò)度消化使得細(xì)胞裂解； 4、DNA污染 。

解決方法： 1、用無(wú)鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細(xì)胞，輕巧吹吸細(xì)胞獲得單細(xì)胞懸液； 2、分離培養(yǎng)物，檢測(cè)支原體； 3、用DNaseI(胰脫氧核糖核酸酶)處理細(xì)胞。針對(duì)懸浮細(xì)胞成簇或成團(tuán)的問(wèn)題，除了上述原因和解決方法外，還需結(jié)合實(shí)驗(yàn)操作細(xì)節(jié)和細(xì)胞特性進(jìn)一步優(yōu)化方案。

     若細(xì)胞因鈣、鎂離子導(dǎo)致聚集，可嘗試在消化后加入EDTA（乙二胺四乙酸）以螯合金屬離子，減少細(xì)胞間黏附。同時(shí)，吹打細(xì)胞時(shí)建議使用孔徑較小的移液槍頭，避免機(jī)械損傷，并采用低速離心（如200g，5分鐘）幫助細(xì)胞溫和沉淀。

     支原體污染常伴隨細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢或形態(tài)異常。若檢測(cè)確認(rèn)污染，除常規(guī)抗生素處理外，可考慮使用支原體清除試劑（如Plasmocin），并定期進(jìn)行PCR檢測(cè)以防復(fù)發(fā)。短期處理無(wú)效時(shí)，建議凍存重要細(xì)胞株并重新構(gòu)建無(wú)菌培養(yǎng)體系。
     對(duì)于蛋白酶消化過(guò)度的問(wèn)題，需根據(jù)細(xì)胞類型調(diào)整消化時(shí)間與酶濃度。例如，某些敏感細(xì)胞可改用低濃度胰酶（0.05%）或膠原酶替代，并在消化后立即用含血清培養(yǎng)基終止反應(yīng)。此外，定期檢查消化液的活性，避免反復(fù)凍融導(dǎo)致效價(jià)下降。

    DNA污染的處理中，DNase I的使用需注意濃度與孵育時(shí)間（通常1-10 μg/mL，37℃作用15-30分鐘），處理后需徹底洗滌以避免殘留酶影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。若細(xì)胞團(tuán)塊仍頑固，可嘗試40 μm細(xì)胞篩過(guò)濾，但需評(píng)估篩網(wǎng)對(duì)細(xì)胞的剪切力影響。

    培養(yǎng)環(huán)境的穩(wěn)定性也至關(guān)重要。保持恒定的pH（7.2-7.4）、溫度（±0.5℃波動(dòng)）及定期更換新鮮培養(yǎng)基，能減少細(xì)胞應(yīng)激性聚集。對(duì)于某些特殊細(xì)胞系（如雜交瘤細(xì)胞），添加抗聚集成劑（如聚乙烯吡咯烷酮，PVP）可能改善分散性。

    通過(guò)多維度排查和精細(xì)化操作，可顯著提升懸浮細(xì)胞的單細(xì)胞率，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供更均一的樣本基礎(chǔ)。