1D3細(xì)胞為懸浮生長(zhǎng)，建議使用RPMI-1640培養(yǎng)基（含10%胎牛血清、1%青霉素-鏈霉素）進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)。培養(yǎng)前需確保超凈工作臺(tái)紫外滅菌30分鐘，所有操作器械（移液器、槍頭、培養(yǎng)瓶等）均經(jīng)過(guò)高壓滅菌處理。細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)需提前將培養(yǎng)基置于37℃水浴預(yù)熱，凍存管從液氮中取出后立即放入37℃水浴快速解凍，離心（1000rpm, 5分鐘）去除凍存液后重懸于新鮮培養(yǎng)基中，接種于T25培養(yǎng)瓶，置于37℃、5% CO?培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
               
 傳代與擴(kuò)增
當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×10?/mL時(shí)需進(jìn)行傳代。輕輕吹打混勻細(xì)胞懸液，按1:2至1:3比例分裝至新培養(yǎng)瓶，補(bǔ)充預(yù)熱培養(yǎng)基至總體積5mL。若需大規(guī)模擴(kuò)增，可逐級(jí)放大至T75培養(yǎng)瓶或細(xì)胞工廠，但需注意保持接種密度不低于5×10?/mL，以避免生長(zhǎng)滯緩。

凍存與質(zhì)量控制
選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，離心后以凍存液（90%血清+10% DMSO）重懸至5×10?/mL，分裝至凍存管，程序降溫后轉(zhuǎn)入液氮長(zhǎng)期保存。定期檢測(cè)細(xì)胞活力（臺(tái)盼藍(lán)拒染法＞95%）和支原體污染（PCR法），并通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)驗(yàn)證表面標(biāo)志物CD15、CD11b的表達(dá)以確認(rèn)細(xì)胞系特性。

注意事項(xiàng)
1. 換液時(shí)避免劇烈震蕩，防止機(jī)械損傷；
2. 若出現(xiàn)異常聚團(tuán)，可用40μm細(xì)胞篩過(guò)濾；
3. 每3代進(jìn)行一次STR鑒定，確保細(xì)胞遺傳穩(wěn)定性。
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