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阿洛夫奧斯特線蟲PCR檢測試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟

發(fā)表時(shí)間:2021-03-23
阿洛夫奧斯特線蟲PCR檢測試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟:
①產(chǎn)品僅用于科研取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其完全溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。

⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其完全溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。

實(shí)驗(yàn)禁忌:
1、濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,ELISA試劑盒稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
2、如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值),請(qǐng)先將樣本稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以稀釋倍數(shù)(×5×n)。
3、各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其正確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)目多,推薦使用排槍加樣。
4、封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
5、嚴(yán)格按照說明書的操縱進(jìn)行,ELISA試劑盒試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
6、從冷躲環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝進(jìn)密封袋中保存。
7、所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
8、本試劑不同批號(hào)組分不得混用。顯色劑B請(qǐng)避光保存。

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